ELISA系統(tǒng)穩(wěn)定的方法
ELISA系統(tǒng)穩(wěn)定的方法
常用劑有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明膠；脫脂奶粉，比較價廉，可以高濃度使用（5%－10％）；還有一些稀有用到的各種動物血清（主要為了排除相似蛋白干擾）和酪蛋白等等。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐，看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去。但*選用什么，要依據(jù)試驗詳細來實踐。應(yīng)留意以下原理：因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用，這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白，對于和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被，親和素:先親和素先包被載體，加入化的DNA，這種包被方法平均、牢固，已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
ELISA檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段。自己也為此苦惱過很長一段時間，跟著自己技術(shù)水平得進步，或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣，也是熟能生巧吧，現(xiàn)在做方陣，做ELISA已是輕車熟路了，以前檢測一種抗體用整整一下戰(zhàn)書還算得暈暈的，現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日基本搞定。可是在新老手操縱過程中老是會泛起或大或小的題目，本人在剛開始做ELISA時就面對良多災(zāi)題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是經(jīng)常做得烏煙瘴氣，好比說花板，假陽性，全顯色，全部顯色，顯色比空缺還低。
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